Título del Proyecto: Ambiente proinflamatorio y macrófagos: efectos sobre la interacción de nanosistemas con los transportadores de ascorbato.
Investigador Principal:
Objetivos del Proyecto:
La hipótesis del proyecto propone que el ambiente proinflamatorio, característico de la colitis ulcerosa, podría influir en la expresión del transportador de ascorbato en macrófagos, determinando así la interacción celular de los nanosistemas. Para ello se plantea como objetivos estudiar la expresión del transportador en la línea celular RAW264.7 y determinar si las condiciones proinflamatorias afectan a la expresión del transportador como a la captación de los nanosistemas.
Metodología:
A continuación, se detalla la metodología a utilizar para la consecución de las tareas del proyecto.
Resultados Preliminares:
La expresión del transportador SVCT-2 se analizó en la línea celular de macrófagos RAW 264.7 con el objetivo de determinar su nivel basal de expresión y valorar su potencial como diana de reconocimiento en el diseño de nanosistemas para la terapia dirigida. Asimismo, se estudió el efecto sobre dicha expresión de condiciones proinflamatorias, las cuales se producen comúnmente en enfermedades como la colitis ulcerosa o procesos inflamatorios.
De este modo, se incubaron las células con lipopolisacárido (LPS) a dos concentraciones (10 y 100 ng/mL) y durante dos tiempos de incubación (2 y 24 horas). Los resultados obtenidos mediante Western Blot mostraron que las células RAW 264.7 expresan el transportador SVCT-2 en condiciones basales. La presencia de LPS no pareció modificar la expresión del transportador bajo las condiciones experimentales evaluadas (Figura 1). Estos resultados se confirmarán mediante la cuantificación de la expresión génica por PCR cuantitativa, lo que permitirá validar los datos obtenidos por Western Blot, cuantificándose la expresión del gen del transportador y corroborando los resultados obtenidos por Western-Blot. Las actividades realizadas se corresponden con las Tareas 1 y 2 de la propuesta.
Figura 1: Expresión de SVCT-2 en la línea celular RAW 264.7 en presencia de lipopolisacárido a 10 y 100 ng/mL durante 2 y 24 horas de exposición.
Figura 2: Grado de captación de las nanoemulsiones fluorescentes en la línea celular RAW 264.7 tras una incubación de 2 horas.
Las actividades englobadas en la Tarea 3 consistieron en determinar el grado de captación de los nanosistemas diseñados para la interacción con el transportador SVCT-2 en macrófagos RAW 264.7. Para ello se utilizó la técnica de citometría de flujo y se observó una elevada captación de los nanosistemas en la totalidad de la población celular (superior al 90 %), evaluándose diferentes concentraciones de nanosistemas para determinar las condiciones óptimas (Figura 2). Estos resultados, aunque prometedores, requieren corroborar que la captación de los nanosistemas se encuentre mediada por la interacción con el transportador SVCT-2, lo cual se realizará próximamente mediante estudios de inhibición competitiva o de bloqueo, esperándose una reducción significativa en dicha población fluorescente.
Finalmente, se considera importante puntualizar que el desarrollo temporal de los experimentos sufrió un retraso inesperado respecto a la previsión inicial, debido a una incidencia en el laboratorio de cultivos celulares causada por una contaminación de las
instalaciones, lo que limitó la obtención de los resultados finales. Pese a ello, dada la relevancia del estudio, esta línea de investigación continúa desarrollándose, por lo que se prevé completar los experimentos en los próximos meses.
Conclusiones:
Los resultados obtenidos suponen un punto de partida fundamental para el desarrollo de nanosistemas como sistemas transportadores de fármacos a macrófagos. Estos avances podrían dar lugar a nuevas oportunidades terapéuticas para el tratamiento de enfermedades autoinmunes, enfermedades infecciosas o el cáncer a través de la nanotecnología.